ما هو اختبار XTT؟
إنه اختبار قياس لوني يقلل من ملح رباعي الزوليوم الأصفر إلى صبغة فورمازان برتقالية في وجود خلايا نشطة التمثيل الغذائي. ترتبط كمية الصبغة المتكونة بعدد الخلايا القابلة للحياة في العينة.
ما هو فحص صلاحية الخلية؟
تعد صلاحية الخلية مقياسًا لنسبة الخلايا الحية السليمة داخل مجموعة سكانية. تُستخدم فحوصات جدوى الخلية لتحديد الصحة العامة للخلايا ، وتحسين الثقافة أو الظروف التجريبية ، وقياس بقاء الخلية بعد العلاج بالمركبات ، مثل أثناء فحص الدواء.
ما هو المبدأ الأساسي لفحوصات MTT؟
مقايسة MTT هي مقايسة لونية لقياس نشاط التمثيل الغذائي للخلية. يعتمد على قدرة إنزيمات أكسيد النيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد (NADPH) المعتمدة على إنزيمات أوكسيريدوكتاز الخلوية لتقليل صبغة التترازوليوم MTT إلى فورمازان غير القابل للذوبان ، والذي له لون أرجواني (الشكل 10.1).
ماذا يقيس اختبار MTS؟
يتم استخدام اختبار MTS لتقييم تكاثر الخلايا ، وحيوية الخلية والسمية الخلوية. يُعتقد أن هذا التحويل يتم بواسطة إنزيمات نازعة الهيدروجين المعتمدة على NAD (P) H في الخلايا النشطة الأيضية. يتم قياس صبغة فورمازان عن طريق قياس الامتصاصية عند 490-500 نانومتر.
كيف تحدد صلاحية الخلايا؟
لحساب الجدوى:
- اجمع عدد الخلايا الحية والميتة معًا للحصول على إجمالي عدد الخلايا.
- قسّم عدد الخلايا الحية على إجمالي عدد الخلايا لحساب إمكانية بقاء النسبة المئوية.
لماذا يتم استخدام DMSO في فحص MTT؟
يضاف DMSO في نهاية التفاعل لإذابة بلورات فورمازان المتكونة من التفاعل. يتم إضافة DMSO فقط بعد الحضانة بصبغة MTT ، بعد إزالة الوسيط من الخلايا ، من أجل إذابة بلورات فورمازان.
ما هو الفرق بين اختبار MTT و MTS؟
يتمثل الاختلاف الرئيسي بين مقايسة MTT و MTS في أن اختبار MTT له خطوة إضافية مرتبطة بإذابة بلورات فورمازان بينما لا يرتبط اختبار MTS بإذابة بلورات فورمازان. فحص MTT و MTS نوعان من المقايسات المستخدمة لقياس صلاحية الخلية في المختبر.
كيف تعمل مجموعة مقايسة قابلية الخلية XTT؟
توفر مجموعة XTT Cell Viability Assay Kit طريقة بسيطة لتحديد أرقام الخلايا الحية عن طريق الامتصاص على قارئ الصفيحة الدقيقة. XTT هو أحد مشتقات التترازوليوم الذي يتم تحويله إلى منتج برتقالي قابل للذوبان في الماء بعد الاختزال بواسطة إنزيمات الميتوكوندريا الموجودة فقط في الخلايا الحية النشطة الأيضية.
كيف يتم استخدام فحوصات بقاء الخلية والسمية الخلوية؟
تعتمد فحوصات بقاء الخلية والسمية الخلوية على وظائف الخلية المختلفة مثل نفاذية غشاء الخلية ونشاط الإنزيم والالتزام الخلوي وإنتاج ATP وإنتاج الإنزيم المشترك ونشاط امتصاص النوكليوتيدات [ 1].
كيف يعمل PMS في مقايسة XTT؟
PMS (N-methyl dibenzopyrazine methyl sulfate). يساعد PMS في دفع تقليل XTT وتشكيل مشتق فورمازان. مبدأ الخلفية لمقايسة XTT تم وصف اختبار تكاثر الخلايا XTT لأول مرة في عام 1988 بواسطة Scudiero et al. (3) كطريقة فعالة لقياس نمو الخلايا وحساسية الأدوية في خطوط الخلايا السرطانية.
كيف تختلف فحوصات صلاحية الخلية عن فحوصات ATP؟
يوفر هذا الاختلاف الأساس للعديد من فحوصات قابلية الخلية الشائعة الاستخدام. يختلف اختبار ATP إلى حد ما من حيث أن إضافة كاشف الفحص يؤدي إلى تمزق الخلايا على الفور ، وبالتالي لا توجد فترة حضانة للكاشف مع مجموعة خلايا قابلة للحياة. فحوصات الحد من التيرازوليوم